Caractérisation des paramètres immunologiques et virologiques chez les patients infectés par le VIH présentant un lymphome d’épanchement primaire au cours du traitement antiblastique et du traitement antirétroviral hautement actif

Contexte Lymphome primitif d’épanchement PEL représente un lymphome particulier infecté par l’herpèsvirus humain HHV- et survient principalement chez les patients infectés par le VIH du virus de l’immunodéficience humaine. Le but de cette étude était d’évaluer les paramètres immunologiques et virologiques, y compris la virémie HHV, Les paramètres biologiques, tels que les taux d’antigène HHV latent et lytique, la charge plasmatique de HHV, la charge d’ADN plasmatique du virus d’Epstein-Barr, la charge de VIH, et le nombre de patients atteints de PEL dont la maladie a été diagnostiquée et traitée. Résultats Le nombre de cellules CD a été évalué avant traitement, pendant le traitement et lors du suivi. Résultats Quatre patients ont été traités par chimiothérapie et thérapie antirétrovirale hautement active HAART, et ont été traités par HAART seul; des patients atteints de rémission complète HHV- a pu être détectée avant l’instauration du traitement dans le plasma chez tous les patients analysés. Les taux de HHV ont diminué après le traitement chez les patients Pendant toute la période d’observation, la charge plasmatique du HHV a montré une corrélation inverse statistiquement significative. pas de corrélation significative avec la charge de VIH et la réponse à la thérapieConclusions Notre analyse démontre que HHV- peut être détecté dans le plasma au début de la PEL; son rôle pronostique doit être exploré Le nombre de cellules CD semble être l’indicateur le plus important de la progression de la PEL

L’herpèsvirus humain HHV- a été reconnu comme l’agent viral du sarcome de Kaposi KS et est associé à des syndromes lymphoprolifératifs: lymphome d’épanchement primaire PEL et maladie de Castleman multicentrique MCD De plus, le HHV- a récemment été associé à des lymphomes présentant une morphologie anaplasique à grandes cellules La PEL représente une entité lymphomateuse particulière constamment infectée par le HHV et fréquemment, mais pas toujours, associée à l’infection par le virus Epstein-Barr EBV Au niveau clinicopathologique, la PEL est caractérisée par dans la phase liquide en l’absence de masses tumorales détectables se propageant le long des membranes séreuses sans motifs de croissance infiltrants La PEL survient principalement, mais non exclusivement, chez les patients infectés par le VIH et représente ~% de tous les lymphomes non hodgkiniens liés au SIDA La virémie HHV a été largement étudiée dans le KS lié au VIH; Il a été constaté que la virémie HHV pouvait être un marqueur du développement du KS et du suivi de la réponse au traitement De plus, il a été rapporté que l’infection par le HHV est associée au VIH et au nombre de cellules CD On a observé que des taux soutenus d’ADN-HHV sérique peuvent être détectés des années avant l’apparition de la MCD, malgré la suppression complète de la réplication du VIH par HAART , et Récemment, il a été constaté qu’une proportion de patients atteints de MCD associée au VIH atteignait une rémission clinique et une clairance du PBH chez les PBMC après l’administration d’anticorps monoclonaux anti-CD. anticorps En revanche, parmi les patients infectés par le VIH avec PEL, aucune donnée n’est disponible sur la détection de l’ADN HHV dans le plasma ou les PBMC; en fait, à notre connaissance, l’ADN HHV n’a été détecté que dans les épanchements de patients atteints de PEL liée au VIH Le présent rapport décrit les résultats immunologiques et virologiques, y compris la charge plasmatique de HHV, au début du lymphome, pendant le traitement, et pendant le suivi pour les patients infectés par le VIH ayant reçu le diagnostic de PEL et traités dans notre établissement National Cancer Institute; Aviano, Italie pendant – L’étude s’est concentrée sur l’évaluation du rôle de ces paramètres en tant qu’indicateurs précoces de la progression de la maladie

Méthodes

Patients Cinq patients consécutifs qui ont reçu un diagnostic de PEL et qui ont été traités dans notre institution au cours de – ont été inclus dans la présente analyse. La PEL a été diagnostiquée comme décrit ailleurs Pour tous les échantillons, des caractérisations immunophénotypiques et immunogénotypiques ont été effectuées hépatite b. Quatre patients ont été traités avec des schémas chimiothérapeutiques de cyclophosphamide, d’hydroxydaunomycine, de vincristine et de prednisone, c’est-à-dire des régimes de type CHOP plus HAART, alors que le patient était traité par HAART seul. Les paramètres biologiques, virologiques et immunologiques Les anticorps contre les antigènes HHV latents et lytiques, la charge plasmatique de HHV, la charge EBV, la charge VIH et le nombre de cellules CD ont été évalués à: avant le début de la chimiothérapie plus HAART ou HAART seul, pendant le traitement, et pendant le suivi, si possible Anticorps à HH V- ont été mesurés par dosage d’immunofluorescence La charge de HHV plasmatique a été évaluée par PCR. En bref, l’ADN a été extrait du plasma en utilisant le kit QiAmp QIAGEN TaqMan en temps réel; Applied Biosystems PCR a été utilisé pour la détection du gène de la protéine de capside -bp de HHV-, comme décrit ailleurs en détail La charge de EBV a été mesurée par un test de PCR basé sur l’amplification de la La charge a été mesurée par le test d’ADN ramifié, version Bayer, et les numérations cellulaires CD ont été évaluées par cytométrie de flux dans un cytomètre de flux EPICS XL. Analyse de l’infection virale dans les cellules tumorales. infection par tumeur avec HHV- et EBV L’analyse de l’infection par HHV- était basée sur la détection d’antigène nucléaire associé à la latence HHV codé par le fragment ouvert de lecture virale ORF et la détection d’ILVIL- viral, un homologue de cytokine HHV; ces analyses ont été effectuées sur des échantillons consécutifs obtenus à des temps différents. La présence de HHV- a été confirmée par analyse PCR de régions du génome HHV, à savoir K, ORFK- et ORF en utilisant des séquences d’amorces précédemment rapportées. compatible avec les séquences génomiques HHV ont été détectées dans tous les cas données non montrées L’expression de HHV-ORF a été confirmée par immunohistochimie avec utilisation d’un anticorps monoclonal de rat Advanced Biotechnologies et vIL- par utilisation d’un anticorps polyclonal de lapin Advanced Biotechnologies Coupes de tissus inclus en paraffine les blocs ont été prétraités dans un four à micro-ondes à W pendant min dans une solution d’EGTA mmol / L; pH, puis immunocolorée sur un immunocolorateur automatisé Nexes; Ventana Medical Systems selon une version modifiée des protocoles de la société Les contrôles négatifs, qui ont invariablement abouti à des résultats négatifs, consistaient en l’omission de l’anticorps primaire et la substitution au PBS Positive contrôles pour ORF constitué d’échantillons de biopsie obtenus chez des patients atteints de SK. vIL- constitué d’échantillons de biopsie obtenus de patients atteints de MCDInfection associée au SIDA EBV a été étudiée par de multiples approches, y compris l’hybridation in situ et PCR hybridation in situ des acides ribonucléiques codés par le virus Epstein-Barr a été réalisée sur des coupes de tissus de blocs cellulaires, comme décrit ailleurs L’analyse PCR de EBV a été réalisée avec les amorces SL- et SL- représentatives du gène antigène nucléaire EBV, comme indiqué ailleurs Analyse statistique Le coefficient de corrélation de Spearman était avec le logiciel SAS, version SAS Institute Les observations à chaque évaluation ont été traitées comme des unités distinctes

Résultats

Patients Entre avril et juin, comme indiqué ailleurs , des cas de lymphomes non hodgkiniens ont été diagnostiqués chez des patients infectés par le VIH dans notre institution. Parmi les cas de lymphome non hodgkinien liés au SIDA, les cas ont été identifiés comme PEL Les derniers cas consécutifs, diagnostiqués et traités entre et, ont été inclus dans l’analyse. Les patients étaient des hommes hommes ayant des rapports sexuels avec des hommes et des utilisateurs de drogues injectables et une femme hétérosexuelle, avec un âge médian de plusieurs années, – ans. La table des patientes avait déjà reçu un diagnostic de toxoplasmose du SNC comme condition préalable au SIDA. Les patientes étaient traitées avec des schémas chimiothérapeutiques de la tuberculose. cyclophosphamide, hydroxydaunomycine, vincristine, et prednisone plus HAART, alors que le patient a été traité avec HAART seul Le patient a eu un diagnostic de MCD mois avant le diagnostic de PEL Patient Il avait reçu un diagnostic de KS années avant le diagnostic de PEL et avait été largement traité par zidovudine et IFN-α, chimiothérapie par l’adriamycine, la bléomycine et la vindésine, puis uniquement par la vinorelbine. Il présentait plusieurs lésions cutanées KS sur l’ensemble du corps. il a commencé le régime de chimiothérapie plus HAART pour le traitement de la PEL Le patient avait seulement une lésion sur son épaule gauche aucune biopsie n’a été faite quand il a commencé le régime de chimiothérapie pour PEL

Tableau View largeTélécharger slideBaseline caractéristiques cliniques des patients atteints de lymphome d’épanchement primaireTable View largeTélécharger slideBaseline caractéristiques cliniques des patients atteints d’un lymphome d’épanchement primaire

Tableau View largeTélécharger slide Paramètres immunologiques et immunologiques pour les patients atteints de lymphome primitif d’épanchement PEL avant et pendant le traitementTable View largeTélécharger les diapositives Paramètres immunologiques et immunologiques pour les patients atteints de lymphome d’épanchement primaire PEL avant et pendant la thérapiePatients et atteint une rémission complète après et des cycles de chimiothérapie, respectivement rémission complète après des mois de HAART seul tableau A la fin de la chimiothérapie, tous ces patients ont été traités avec HAARTIn contraste, chez les patients et, PEL rapidement progressé, et ils ont terminé seulement et cycles de chimiothérapie plus HAART, respectivement tableau Chez les deux patients, KS Les patients sont restés stables après une période de survie de plusieurs mois. Les patients sont décédés d’une insuffisance cardiaque et le patient est décédé d’une infection par le VIH et la progression de la PEL. Le patient est toujours en vie après des moisPlasma HHV- load Avant traitement, charges HHV plasmatiques étaient dissuadés miné pour les patients et étaient détectables dans toute la gamme, -, copies / mL; Avant la thérapie, tous les patients présentaient des anticorps contre les antigènes HHV-lytiques et seulement des anticorps contre les antigènes latents. Aucune corrélation n’a été trouvée entre les anticorps contre les antigènes latents ou lytiques et les données de charge plasmatique de HHV non montrées. La charge était légèrement réduite chez les patients / mL, les copies / mL chez le patient sans détermination de base et non détectées chez le patient. La PEL était en rémission complète chez ces patients à ce moment-là. En revanche, les patients présentaient une diminution marquée du taux de HHV plasmatique. Après la fin de la chimiothérapie, chez les patients ayant atteint une rémission complète, la charge plasmatique de HHV a pu être évaluée pendant le suivi. Le patient a été évalué plusieurs fois et la virémie HHV n’a pas été évaluée. détecté ou la charge était à un niveau très bas Le patient avait une plage de charge plasmatique de HHV constante, – copies / mL, et le patient a eu une charge de HHV plasmique indétectable depuis la fin du traitement; Le tableau affiche les valeurs de la dernière visite de suivi disponible

Tableau View largeTélécharger slide Paramètres immunologiques et immunologiques pour les patients atteints de lymphome d’épanchement primitif PEL au suivi View largeTélécharger les diapositives Paramètres immunologiques et immunologiques pour les patients atteints de lymphome d’épanchement primaire PEL au suiviVirémie avec HHV- et EBV Démonstration d’infection des cellules tumorales par EBV in situ Ces résultats ont été confirmés par l’analyse par PCR de la région antigénique nucléaire EBV des patients EBVAll qui présentaient des anticorps IgG dirigés contre les antigènes EBV; par conséquent, les niveaux d’EBV ont été évalués avant le traitement, à la fin du traitement et pendant le suivi. Chez tous les patients évaluables, la virémie EBV a été détectée, et les cellules tumorales ont eu des résultats positifs pour la présence de EBV, avait les valeurs les plus élevées:, copies / mL et, copies / mL, respectivement Malheureusement, pour le patient, dont les cellules tumorales étaient également positives pour la présence d’EBV, le niveau d’EBV n’a pas pu être évalué au même moment. période, charge EBV corrélée à la charge plasmatique HHV P & lt; La charge plasmatique en HHV, le nombre de cellules CD et le nombre de cellules CD et la charge VIH ont été évalués avant le traitement, à la fin de la thérapie et pendant le suivi, lorsque possible. Pendant toute la période d’observation, la charge plasmatique du HHV a été une corrélation inverse statistiquement significative avec le nombre de cellules CD P =, mais sans corrélation significative avec la charge VIH Avant le traitement, la charge de HHV, ainsi que le nombre de cellules CD et la charge VIH, n’étaient pas associées à une réponse à la thérapieDetermination of HHV-ORF et vIL- dans les cellules tumorales Chez les patients et les patients, des échantillons consécutifs étaient disponibles pour l’analyse, alors que seul l’échantillon tumoral était disponible pour l’analyse dans les cas immunohistochimiques pour la protéine ORF du HHV- a révélé que cet antigène était détecté dans le noyau de presque tous les En revanche, la coloration de vIL- était cytoplasmique et était limitée à un nombre limité de cellules tumorales. Comme le montre le tableau, la dynamique de l’expression de l’ORF par les cellules tumorales PEL était indépendante. ndent à partir du moment de la collecte de l’échantillon de tumeur En revanche, l’expression de la protéine vIL- était variable, bien qu’elle soit non retrouvée ou mal exprimée avant la thérapie.

Table View largeTélécharger slideHuman herpesvirus expression protéique dans des échantillons de cellules tumoralesTable View largeTélécharger slideHuman herpesvirus expression protéique dans des échantillons de cellules tumorales

Discussion

La clairance du HHV a été observée dans les PBMC Chez les patients avec PEL, les taux d’ADN HHV ont été mesurés dans les épanchements séreux, mais une corrélation claire avec le traitement n’a pas été observée Ici, nous rapportons que HHV À notre connaissance, ce sont les premières données à démontrer la possibilité de détecter la virémie HHV chez les patients atteints de PEL liée au VIH. Nous avons pu évaluer la charge plasmatique de HHV. avant le début de la PEL seulement chez les patients qui ne présentaient aucune autre maladie liée au HHV, et le niveau de HHV n’était pas mesurable des semaines avant le début des données PEL non montrées. Dans ce cas particulier, il semble que des niveaux élevés de HHV Cependant, nos données ont montré que, dans la PEL liée au VIH, la virémie HHV peut être détectée même si la réplication du VIH est complètement supprimée, comme cela a été récemment démontré. pour MCD En fait, les patients,, et h Les patients atteints de KS lié au SIDA présentaient les charges plasmatiques les plus élevées de HHV Après le traitement, les deux patients ont présenté une diminution très importante de la charge plasmatique de HHV sans amélioration de la PEL. que les progéniteurs cellulaires KS circulants infectés par le HHV- sont présents chez les patients atteints de KS liés au VIH et que la virémie HHV peut refléter leur présence dans le sang. Par conséquent, cette population cellulaire pourrait être responsable des taux élevés de virémie HHV. et la diminution consécutive après la chimiothérapie chez nos patients avec PEL et KS Cependant, aucune conclusion finale ne peut être tirée Nous avons analysé seulement les patients avec PEL et KS, et en plus, ils ont eu des présentations cliniques très différentes de KS: patient avait une maladie cutanée étendue prétraités, avec un stade antérieur de IV-A selon la classification de Krigel et Friedman-Kien , alors que l’autre patient n’avait que des lésions cutanées Patients avec PEL w Le patient traité par HAART seul présentait une clairance complète de la virémie HHV. Chez les patients ayant une rémission complète et durable, les patients avaient une rémission complète sans récurrence de la PEL chez les patients et une rechute. cela a duré ⩾ mois, avec une bonne augmentation du nombre de cellules CD; l’autre, traitée par HAART et un régime de cyclophosphamide, d’hydroxydaunomycine, de vincristine et de prednisone, n’a eu qu’une légère diminution de la charge plasmatique de HHV à la fin du traitement mais a eu des résultats essentiellement négatifs pendant toute la période de suivi et une excellente cellule CD Le troisième patient en rémission complète avait une charge plasmatique de HHV relativement élevée à la fin du traitement et pendant le suivi et une diminution du nombre de cellules CD, et il est mort après la réapparition de la PEL et la progression de la maladie VIH. Comme nous l’avons déjà mentionné, la diminution de la charge plasmatique de HHV a été faible, mais la numération cellulaire CD reste faible. Toutes ces données suggèrent que la chimiothérapie peut avoir une action aiguë directe contre la réplication HHV, mais la constitution immunitaire pourrait jouer un rôle crucial dans le contrôle de la PEL. En fait, chez les patients atteints de PEL, la charge plasmatique de HHV a montré une corrélation inverse avec le nombre de cellules CD tout au long de la grossesse. Période d’observation Jusqu’à présent, Oksenhendler et al et Hocqueloux et al ont suggéré l’importance du statut immunologique et des immunoreconstitutions dans la progression de la PEL, chez qui des rémissions complètes ont été rapportées chez des patients atteints de PEL liée au VIH. En plus d’étudier la corrélation entre la charge plasmatique de HHV, la charge VIH et le nombre de cellules CD, nous avons évalué la corrélation entre la charge plasmatique de HHV et la charge EBV et nous avons trouvé qu’ils étaient directement corrélés pendant toute la période d’observation. En outre, il convient de noter que les patients et ceux qui présentaient une progression de la PEL avaient des pourcentages plus élevés de cellules PEL exprimant la vIL que les autres patients, qui ont obtenu des résultats complets. table de rémission vIL- est une protéine virale exprimée sur la réactivation HHV- Toutes ces données indiquent que le développement de PEL et la réponse t o la chimiothérapie et la HAART, ou HAART seule, sont liées au contrôle immunologique de l’infection par le HHV et cette observation peut indiquer que la réactivation du HHV et du EBV est particulièrement fréquente chez les patients ayant un nombre de cellules CD extrêmement bas. Toutes ces études suggèrent que la virémie HHV peut être détectée au début de la PEL, et que la charge plasmatique de HHV peut être associée à la charge EBV mais montre une corrélation inverse avec le nombre de cellules CD. Cependant, son rôle pronostique doit être exploré, alors que le nombre de cellules CD semble toujours être l’indicateur le plus important de la progression de la PEL

Remerciements

Nous remercions Daniela Furlan pour son aide experte en préparation et révision de manuscrits. Soutien financier Istituto Superiore di Sanità et subventions AIRC Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: no conflict